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—— 中國食品雜志社
目的：基于逆轉(zhuǎn)錄-酶促重組等溫擴增（reverse transcription-enzymatic recombinase amplification，RT-ERA）技術，以MS2作為模式過程控制病毒，建立一種貝類食品中GI與GII型諾如病毒（norovirus，NoV）雙重熒光RT-ERA快速檢測方法。方法：分別將GI、GII NoV參考靶序列克隆到帶有T7啟動子的載體中，通過體外轉(zhuǎn)錄的方式獲得高純度NoV RNA參考樣品。以設計的MS2噬菌體引物探針，與實驗室前期篩選的GI、GII NoV引物探針進行雙重熒光RT-ERA實驗，并對反應體系和反應程序進行優(yōu)化，分析方法的靈敏度。最后，采用建立的方法開展真實樣本檢測，以GB 4789.42—2016《食品微生物學檢驗?諾如病毒檢驗》為參比方法進行檢測結果對比，確定方法的準確性和可行性。結果：建立MS2與GI、MS2與GII兩組雙重熒光RT-ERA檢測方法，最佳引物及探針體積分別為4.1 μL與1.8 μL，檢測時間可縮短至10 min左右，且最低可檢出102 拷貝/μL的NoV核酸樣品。應用所建立的方法對29 份真實樣品進行檢測，檢測結果與GB 4789.42—2016一致。結論：本研究建立的雙重熒光RT-ERA檢測方法可實現(xiàn)對MS2、GI和GII NoV的同時檢測，且靈敏度高、準確性強，為今后NoV現(xiàn)場快速檢測提供一定基礎。
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