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—— 中國食品雜志社
選擇降血壓肽WQVLPNAVPAK，人工合成大腸桿菌密碼子優(yōu)化后六串聯(lián)體血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽（angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide，ACEIP）基因片段ACEIP，將其克隆至表達載體pET30a后構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a-ACEIP。該重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶NdeI和HindIII雙酶切鑒定、菌落聚合酶鏈式反應(yīng)鑒定后，將其化轉(zhuǎn)至大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細胞中，構(gòu)建了表達工程菌大腸桿菌BL21（DE3）/ pET30a-ACEIP。工程菌經(jīng)終濃度為0.8 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷導(dǎo)后，Tricine-十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示在分子質(zhì)量約為8.7 kDa處出現(xiàn)一條明顯條帶。經(jīng)Ni2＋親和層析、腸激酶酶切后純化得到串聯(lián)多肽ACEIP。其中融合蛋白的表達量為61.30 mg/L，串聯(lián)多肽ACEIP的表達量為57.84 mg/L。串聯(lián)多肽經(jīng)胰蛋白酶酶解后的IC50值為6.39 mg/mL，ACE抑制活性高于單體肽WQVLPNAVPAK的抑制活性（IC50為12.34 mg/mL）。
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