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—— 中國食品雜志社
目的：建立A群輪狀病毒（rotavirus，RV）一步法反轉(zhuǎn)錄微滴式數(shù)字聚合酶鏈式反應（reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction，RT-ddPCR）方法。方法：篩選特異性引物探針，建立并優(yōu)化一步法RT-ddPCR方法，確定特異性；制備含A群RV目的片段的RNA標準物質(zhì)，確定建立方法的檢測限、準確度、重復性和復現(xiàn)性。A群RV陽性糞便樣品梯度稀釋后制作染毒液，制備人工染毒樣品，分離病毒與食品基質(zhì)，濃縮得到病毒懸液，提取RNA后，比較不同食品基質(zhì)中一步法RT-ddPCR檢測結(jié)果。結(jié)果：建立的一步法RT-ddPCR方法定量限為58 000.00～5.80 拷貝/μL，具有良好的特異性、準確性、靈敏度、重復性和復現(xiàn)性。各染毒水平下A群RV檢出量和回收率在不同食品基質(zhì)中存在顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論：研究建立的一步法RT-ddPCR方法可準確定量A群RV RNA，食品基質(zhì)可影響一步法RT-ddPCR檢測結(jié)果，通過病毒回收率可計算食品中A群RV的實際載量。
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