海參巖藻聚糖硫酸酯(sea cucumber fucoidan,SC-FUC)是海參體壁中的重要活性成分之一。研究表明多糖的生物活性與其高級結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究體外水平下不同高級結(jié)構(gòu)墨西哥海參巖藻聚糖硫酸酯(fucoidan from Holothuria mexicana,Hm-FUC)對脂肪細(xì)胞分化活性的影響,以期為SC-FUC的更高效利用及深入開發(fā)提供理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)以3T3-L1前脂肪細(xì)胞為研究對象,采用“傳統(tǒng)雞尾酒法”建立脂肪細(xì)胞分化模型,通過四甲基偶氮唑鹽法、油紅O染色法和逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法系統(tǒng)研究不同高級結(jié)構(gòu)Hm-FUC對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程的調(diào)控作用及其分子機(jī)制。結(jié)果表明:4 種Hm-FUC均可顯著抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖和分化,減少成熟脂肪細(xì)胞數(shù)目,降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量;顯著下調(diào)脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SREBP1c、PPARγ、C/EBPα的mRNA表達(dá)(P<0.05);顯著上調(diào)Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵基因LRP5、LRP6、Frz、β-catenin、cmyc、Cyclin D1的mRNA表達(dá)(P<0.05),顯著下調(diào)負(fù)調(diào)控因子GSK3β的mRNA表達(dá)(P<0.05),其中Hm3(210 kDa,無規(guī)卷曲短鏈構(gòu)象)效果最為顯著,但對Wnt10b mRNA表達(dá)無顯著影響。綜上所述,Hm-FUC是通過激活Wnt/β-catenin信號通路,下調(diào)脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)從而抑制成脂,其中當(dāng)分子質(zhì)量為210 kDa,鏈構(gòu)象為無規(guī)卷曲短鏈狀時,其抑制脂肪細(xì)胞分化活性最強(qiáng)。
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