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—— 中國食品雜志社
將不同長度類彈性蛋白多肽（elastin-like polypeptide，ELP）與納米抗體融合表達，獲得具有溫度響應(yīng)能力的抗黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）納米抗體。采用遞歸定向連接克隆得到重組表達載體pET30a-G8-ELP20、pET30a-G8-ELP40、pET30a-G8-ELP60、pET30a-G8-ELP80，分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）菌株，表達后經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分析顯示4 種融合蛋白均以不溶性包涵體形式存在于菌體沉淀中，對其進行變性處理后，分別采用稀釋復(fù)性、可逆相變循環(huán)（inverse transition cycling，ITC）純化、透析復(fù)性、柱上復(fù)性4 種方式對包涵體蛋白進行復(fù)性。SDS-PAGE分析4 種復(fù)性方式分別獲得的4 種融合蛋白，結(jié)果顯示其純度差異不顯著，但ITC純化蛋白得率最高，分別為83%、90.7%、89.5%、88.3%；間接競爭酶聯(lián)免疫吸附實驗測定復(fù)性后融合蛋白活性，結(jié)果表明由稀釋復(fù)性法獲得的G8-ELP80重組蛋白IC50最低（4.35 ng/mL）；濁度分析法測得融合不同長度ELP標簽納米抗體的相變溫度分別為45、38、32、28 ℃；圓二色譜分析顯示4 種融合蛋白二級結(jié)構(gòu)均以β-折疊、β-轉(zhuǎn)角為主，與預(yù)估結(jié)果相符。本研究將ELP標簽與抗AFB1納米抗體融合表達，實現(xiàn)了納米抗體的溫度刺激響應(yīng)性，系統(tǒng)比較了不同復(fù)性方式對蛋白特性的影響，為后續(xù)AFB1檢測分析提供了基礎(chǔ)。
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