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—— 中國食品雜志社
通過PCR從克隆載體pUC18-3Z/Cry2A*上擴增水稻偏愛型密碼子優(yōu)化的抗蟲基因cry2A*,經(jīng)限制性內切酶NdeI和BamHI雙酶切定向插入到原核表達載體pET-28a(+),成功構建了在表達蛋白的N端只帶有6個組氨酸標簽的融合蛋白表達載體pET-28a(+)/Cry2A*,并轉入大腸桿菌BL21(DE3)中。通過對其表達條件進行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)在IPTG濃度為0.05mmol/L、誘導時間為3h、誘導溫度為20℃的表達條件下目的蛋白大部分以可溶形式進行表達。采用Ni-NTA親和柱純化得到高純度目的蛋白,薄層掃描分析蛋白純度達到95%。
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