領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：建立一種精確可靠的鑒定常見的1 0 種動(dòng)物( 豬、狗、牛、山羊、綿羊、馬、雞、鼠、三文魚和鹿)的方法。方法：利用12S rRNA 基因的限制性酶切末端片段長(zhǎng)度多態(tài)性(terminal restriction fragment lengthpolymorphism，T-RFLP)鑒別動(dòng)物種類。將線粒體12S rRNA 基因通過引物的5＇端用FAM 熒光標(biāo)記，從基因組DNA 中擴(kuò)增450bp 的目的片段。引物對(duì)1(下游引物FAM標(biāo)記，上游引物不標(biāo)記)擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Alu Ⅰ酶切。引物對(duì)2(上游引物FAM標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記)擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Tru9 Ⅰ酶切。得到的酶切產(chǎn)物分別在遺傳分析儀ABI 3100 上進(jìn)行毛細(xì)管電泳，片段大小用Peak Scanner 1.0 軟件分析。結(jié)果：根據(jù)Alu Ⅰ酶切圖譜能夠區(qū)分雞、馬、豬和三文魚，而鹿和牛、山羊和綿羊、鼠和狗因酶切圖譜相同無法分開。根據(jù)Tru9 Ⅰ酶切圖譜，能夠進(jìn)一步將鹿和牛、山羊和綿羊、鼠和狗分開。同一種動(dòng)物不同個(gè)體的酶切圖譜完全相同，結(jié)果具有可重復(fù)性。沒有出現(xiàn)物種內(nèi)多態(tài)的現(xiàn)象。大多數(shù)情況下，實(shí)際得到的末端片段長(zhǎng)度與理論值非常接近，只存在2 ～5bp 的差異。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果精確，適用于鑒定動(dòng)物種類。
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