領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
以單增李斯特菌基因組DNA 為模板，利用自行設(shè)計的引物，通過PCR 法擴增出單增李斯特菌的iap 基因。在iap 基因的5 ＇端和3 ＇端分別引入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ 2 個酶切位點將其克隆到pMD-18T 載體上，構(gòu)建克隆載體pMD-18T-iap。經(jīng)測序正確后，將iap 基因克隆至表達載體pET-28a 上構(gòu)建表達質(zhì)粒pET-28a-iap。在IPTG 誘導(dǎo)下，攜帶pET-28a-iap 的E.coli BL21(DE3)高效表達分子質(zhì)量約為60kD 的可溶性蛋白及包涵體形式的蛋白，其中可溶性蛋白占總p60 蛋白含量的76.3% 左右。誘導(dǎo)表達的可溶性蛋白通過Ni2+ 親和層析柱純化得到純度在95.6% 以上的重組p60 蛋白，其提取率為68.3% 左右。
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