領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為獲得重組花生過敏原Ara h 2。通過RT-PCR 合成cDNA，并以此為模板進行PCR 擴增目的基因Ara h 2，擴增產(chǎn)物經(jīng)純化后克隆至pMD19-T Simple 載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD19-T-Ara h 2。上述重組質(zhì)粒經(jīng)酶切純化后定向克隆到pGEX-4T-1 表達載體中，構(gòu)建原核表達載體pGEX-4T-1-Ara h 2，并轉(zhuǎn)化表達宿主菌BL21-codonPlus(DE3)-RIPL 中，經(jīng)IPTG 誘導表達。SDS-PAGE 電泳結(jié)果表明，該表達蛋白大小約為46kD，與理論值相符。通過Glutathione Sepharose 4B 凝膠親和層析方法純化融合蛋白GST-Ara h 2，獲得融合蛋白純度約為90%。Western blotting 分析表明，經(jīng)純化的融合蛋白能與抗Ara h 2 兔血清發(fā)生特異性反應(yīng)，說明該蛋白具有良好的免疫原性。
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