領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
研究海棲熱袍菌木聚糖酶B（TmXynB）的定向進(jìn)化、高效表達(dá)和應(yīng)用。構(gòu)建突變文庫(kù)后經(jīng)兩輪篩選，獲得一個(gè)在酸性高溫下具有高比活力的突變體（mTmXynB）。突變體mTmXynB的最適pH值和最適溫度為5.5和90?℃，較野生型的最適pH值和最適溫度分別下降了0.5和10?℃，對(duì)小麥阿拉伯木聚糖的比活力由529?U/mg提高至1?565?U/mg。序列比對(duì)表明，mTmXynB中3?個(gè)氨基酸發(fā)生突變，分別為Asn91Ser、Trp129Arg和Arg143Glu。經(jīng)定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)，Arg143Glu通過(guò)改變局部蛋白表面的電荷分布提高了其耐酸性，Trp129Arg通過(guò)打破疏水平臺(tái)降低了酶的最適溫度，而Asn91Ser可能通過(guò)改變底物結(jié)合位點(diǎn)Trp89的構(gòu)象提高該酶的催化活力。進(jìn)一步將mTmXynB表達(dá)至畢赤酵母，經(jīng)高密度發(fā)酵酶活力達(dá)18?000?U/mL。突變體mTmXynB和野生型TmXynB分別添加至麥芽糖化過(guò)程中，結(jié)果表明mTmXynB在150?U/g麥芽添加量時(shí)效果最好，可降低45%的過(guò)濾時(shí)間和8.7%的料液黏度。而TmXynB在600?U/g麥芽添加量時(shí)效果最好，分別降低39%和8.1%的過(guò)濾速度和料液黏度。因此，突變體mTmXynB在啤酒工業(yè)中具有很好的應(yīng)用前景。
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