領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
利用重疊延伸法對嗜熱球菌Thermococcus sp.的高溫酸性α-淀粉酶基因BD5088進(jìn)行體外A154C/G155C雙點(diǎn)定點(diǎn)突變，通過原核表達(dá)載體pET30a構(gòu)建表達(dá)載體pET-BD5088C2，在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)，酶學(xué)性質(zhì)分析表明，突變淀粉酶拓寬了反應(yīng)pH值范圍，尤其是酸性條件下提高更為顯著。BD5088淀粉酶在100℃條件下酶活力半衰期約為22min，而突變酶酶活力半衰期40min，突變酶酶活力比BD5088淀粉酶提高近1倍。加熱60min時，突變酶酶活力仍可維持原活力的40%，而BD5088淀粉酶只能維持20%左右。說明其熱穩(wěn)定性得到有效的提高。另外，突變酶在中溫和90℃條件下酶活力有所提高，65℃時酶活力提高將近1倍。結(jié)果表明，BD5088淀粉酶的154、155位殘基的突變?yōu)镃ys對維持其熱穩(wěn)定性起到重要的作用，并且對其酶學(xué)性質(zhì)有較大的影響，可能參與了二硫鍵的形成。
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