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—— 中國食品雜志社
目的：利用低溫聚合酶鏈式反應對大豆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性進行改良。方法：將6 種在較低退火溫度下擴增出的超氧化物歧化酶基因插入到表達載體pREP5N上，構建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6表達載體，轉入大腸桿菌后得到工程菌，誘導其在大腸桿菌中進行蛋白表達，并進行酶活力測定，篩選高酶活力菌株。結果：將已克隆的目的基因序列與已知的大豆MnSOD基因序列比對分析，一致性平均為86.57%，氨基酸序列同源性平均為82.58%。對已獲得的6 種工程菌進行蛋白質(zhì)提取，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳結果顯示表達產(chǎn)物的分子質(zhì)量約為26 kD。經(jīng)1%差異水平分析，改良后的SOD酶活力均有極顯著提高，平均比對照菌株的酶活力提高1.95 倍。結論：本實驗證明低溫聚合酶鏈式反應是改變酶活性的一種有效方法，為超氧化物歧化酶在生產(chǎn)中的應用提供了技術支持。
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