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假腸膜明串珠菌甘露醇脫氫酶基因的克隆及表達(dá)
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 166 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 程雅韻,王 新,鄭 琳,李官浩,崔虎山,金 清
關(guān)鍵詞: 甘露醇;甘露醇脫氫酶;假腸膜明串珠菌;基因克隆;表達(dá)
摘要:

利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從假腸膜明串珠菌中擴(kuò)增出甘露醇脫氫酶(mannitol dehydrogenase,MDA)基因的結(jié)構(gòu)基因,克隆入表達(dá)載體pETDuet-1,構(gòu)建了甘露醇脫氫酶表達(dá)質(zhì)粒pETDuet-1-mdh,將其轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)。假腸膜明串珠菌甘露醇脫氫酶結(jié)構(gòu)基因長度為1 017 bp,重組甘露醇脫氫酶基因在大腸桿菌內(nèi)成功表達(dá),其蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為36.0 kD;重組甘露醇脫氫酶活力為0.15 U/mg pro,高于假腸膜明串珠菌中甘露醇脫氫酶活力0.03 U/mg pro。

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