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—— 中國食品雜志社
目的：建立實時熒光聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測轉基因DAS-44406-6品系大豆的定性檢測方法和使用數(shù)字PCR檢測轉基因DAS-44406-6品系大豆的定量檢測方法。方法：針對轉基因DAS-44406-6大豆品系，進行5’-RACE，測定該品系轉基因大豆外源片段與大豆染色體重組的邊界序列，并根據(jù)該邊界序列設計引物和探針。使用23 種非DAS-44406-6品系轉基因植物作為陰性對照測試實時熒光PCR引物和探針的特異性，以DAS-44406-6品系樣品制備6 個含量梯度的樣品進行檢測低限實驗。使用數(shù)字PCR技術進行定量檢測，并確定定量檢測的低限。結果：建立的轉基因DAS-44406-6大豆品系的實時熒光PCR特異性檢測方法品系鑒定特異性較強，實時熒光PCR檢測方法的檢測低限在模板DNA濃度為100 ng/反應時，為0.01%的轉基因大豆含量，約為16.6 個拷貝的DAS-44406-6基因組DNA；數(shù)字PCR檢測方法的檢測低限在模板DNA濃度為0.5 ng/反應、轉基因大豆含量為1%時，相對標準偏差為0.7%。因此，建立的轉基因DAS-44406-6大豆品系實時熒光PCR和數(shù)字PCR特異性檢測方法符合轉基因檢測的要求。
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