領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
采用乳酸菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行綠色木霉纖維二糖水解酶基因cbhⅡ 的表達(dá)研究。參照GenBank上發(fā)表的綠色木霉（Trichoderma viride）cbhⅡ 基因（GenBank登錄號(hào)：M55080）設(shè)計(jì)引物并通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)克隆獲得其cDNA序列長(zhǎng)1 441 bp。為了達(dá)到表達(dá)分泌該酶的目的，在其基因上游序列前添加了大小為80 bp的信號(hào)肽序列。進(jìn)一步通過(guò)生物信息學(xué)方法將密碼子按照乳酸菌的偏好性進(jìn)行了優(yōu)化，通過(guò)全基因合成獲得了優(yōu)化后的cbhⅡ 基因。將該基因與穿梭表達(dá)載體pMG36e連接, 構(gòu)建原核表達(dá)載體pMG36e-S-cbhⅡ ；利用電轉(zhuǎn)化方法將其轉(zhuǎn)入乳酸乳球菌NZ3900感受態(tài)細(xì)胞中構(gòu)建重組乳酸菌，純化的重組菌蛋白通過(guò)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，得到一條約為53 kD的目的蛋白條帶，與預(yù)期大小相符；利用3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定培養(yǎng)基上清液中水解纖維素酶的活力達(dá)到16.7 U/mL，菌體裂解液上清液和菌體沉淀幾乎沒(méi)有酶活力。結(jié)果表明，纖維二糖水解酶基因信號(hào)肽序列被乳酸乳球菌正確識(shí)別，并成功實(shí)現(xiàn)了胞外表達(dá)。
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