領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：在獲得脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）抗獨(dú)特型納米抗體的前期基礎(chǔ)上，將納米抗體作為酶標(biāo)抗原的替代物，應(yīng)用于熒光定量免疫聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）體系，實(shí)現(xiàn)DON的高靈敏、綠色免疫分析。方法：將特異性結(jié)合DON抗體的噬菌體展示納米抗體（P-28）作為競(jìng)爭(zhēng)抗原，以編碼P-28納米抗體的DNA為靶標(biāo)，設(shè)計(jì)特異性PCR擴(kuò)增引物，優(yōu)化熒光定量免疫PCR退火溫度、抗DON抗體濃度、P-28投入量等參數(shù)，建立基于間接競(jìng)爭(zhēng)模式的熒光定量免疫PCR檢測(cè)DON的方法。結(jié)果：本研究建立的熒光定量免疫PCR方法線性檢測(cè)范圍為0.1～1 000 ng/mL，IC50值為（3.96±2.21）ng/mL，最低檢出限為0.048 ng/mL，并與其他真菌毒素?zé)o交叉反應(yīng)。結(jié)論：該方法直接使用噬菌體展示納米抗體作為競(jìng)爭(zhēng)抗原的替代物，應(yīng)用于免疫PCR體系，避免了使用傳統(tǒng)的化學(xué)合成酶標(biāo)抗原所帶來(lái)的環(huán)境污染、操作毒性等缺陷，并具有良好的特異性及靈敏度。
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