領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
從綠色木霉（Trichoderma viride）WX24菌株發(fā)酵中分離、純化葡萄糖氧化酶（T. viride glucose oxidase，TvGOD），研究其酶學(xué)特性，為葡萄糖氧化酶的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。將綠色木霉胞外產(chǎn)酶發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨沉淀、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水層析和Sephadex G-75分子篩凝膠過濾層析純化，并研究酶學(xué)性質(zhì)。由十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測得TvGOD表觀分子質(zhì)量93 kDa，達(dá)到電泳純。經(jīng)純化，TvGOD比活力為426.67 U/mg，純化倍數(shù)為14.36，活力回收率19.15%。TvGOD最適pH 6.0，最適反應(yīng)溫度60 ℃。70 ℃以下、pH 4～7之間，TvGOD穩(wěn)定性好。所測金屬離子中，Na＋和K＋對酶活力無影響，F(xiàn)e2＋、Cu2＋和Zn2＋有輕微抑制作用，Mg2＋和Ca2＋對TvGOD有顯著激活作用，而重金屬離子Hg2＋和Pb2＋幾乎完全抑制酶活力；絲氨酸蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟和金屬螯合劑乙二胺四乙酸二鈉對TvGOD抑制作用較為強(qiáng)烈；TvGOD對表面活性劑十二烷基硫酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、Triton X-100和吐溫80表現(xiàn)出強(qiáng)穩(wěn)定性。以葡萄糖為底物，酶Km和Vmax分別為11.62 μmol/L和8.244 mmol/（L·min）。基于TvGOD在高溫、酸性下的高活性與高穩(wěn)定性以及對表面活性劑的高耐受性、對底物葡萄糖高親和性等優(yōu)良特性，TvGOD很有希望在面粉加工、食品飲料、飼料及生物傳感器領(lǐng)域以及需要在高溫、高酸環(huán)境下使用的生物技術(shù)工業(yè)中應(yīng)用。
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