領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
規(guī)律間隔成簇短回文重復序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）/CRISPR相關(guān)蛋白9（CRISPR-associated protein 9，Cas9）主要元件Cas9蛋白一般采用大腸桿菌表達，但在表達純化過程中易出現(xiàn)形成包涵體形式的不溶解性蛋白，內(nèi)毒素含量高、蛋白過大導致蛋白折疊不正確、產(chǎn)量低等問題。為實現(xiàn)化膿性鏈球菌（Streptococcus pyogenes）Cas9蛋白（SpCas9）在大腸桿菌中的高效可溶表達，進一步促進其應(yīng)用及編輯技術(shù)的推廣，本研究應(yīng)用GB1促溶標簽提高Cas9蛋白表達量及溶解度，同時通過使用多重啟動子策略進一步提高了Cas9蛋白表達量。兩種策略的組合使Cas9蛋白表達量提升了2.52 倍。體外酶切分析顯示融合GB1標簽的Cas9蛋白功能活性不受影響。進一步組裝RNP復合物轉(zhuǎn)化黑曲霉宿主成功破壞了pyrG基因。
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