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—— 中國食品雜志社
為優(yōu)化桑黃子實體多糖提取工藝，探討其體外抗氧化活性及其對D-半乳糖（D-galactose，D-gal）誘導的小鼠胚胎成纖維3T3細胞損傷的保護作用，本實驗采用水提醇沉法，通過單因素-正交試驗優(yōu)化提取工藝，并經(jīng)瓊脂糖凝膠層析柱純化，通過噻唑藍法及β-半乳糖苷酶（senescence-associated-β-galactose，SA-β-gal）染色法觀察桑黃子實體多糖對D-gal誘導的3T3細胞損傷模型的作用，測定桑黃子實體多糖對細胞上清液中活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平、丙二醛（malondialdehyde，MDA）濃度、過氧化氫酶（catalase，CAT）活力的影響。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應法檢測桑黃多糖對衰老細胞中轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（transcription factor E2-related factor 2，Nrf2）-抗氧化反應元件（antioxidant response elements，ARE）信號通路中相關(guān)基因mRNA表達水平。結(jié)果表明：提取溫度80 ℃、提取時間3 h、料液比1∶40（m/V）、提取次數(shù)4 次，平均多糖提取率為6.64%；純化處理后多糖質(zhì)量分數(shù)為76.28%；桑黃子實體多糖對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率為77.14%，對超氧陰離子自由基清除率為31.22%，對羥自由基清除率為56.86%，具有抗氧化活性；噻唑藍法結(jié)果顯示，與模型組相比，桑黃子實體多糖質(zhì)量濃度達到100 μg/mL時細胞存活率極顯著增加（P＜0.01）；SA-β-gal染色法結(jié)果顯示桑黃子實體多糖可顯著提高模型組細胞存活率（P＜0.05），對D-gal誘導的3T3細胞細損傷具有保護作用；與模型組相比，桑黃子實體多糖組顯著降低3T3細胞外液中ROS水平（P＜0.05）、極顯著降低MDA濃度（P＜0.01）、顯著提高CAT活力（P＜0.05）；與模型組相比，桑黃子實體多糖組中Nrf2通路及其3 個下游基因（GCLC、NQO1和GCLM）的mRNA表達顯著升高（P＜0.05）。結(jié)論：桑黃子實體多糖提取方法穩(wěn)定可靠，獲得的桑黃子實體多糖具有一定的抗氧化活性，能提高細胞的增殖活性，對D-gal誘導的3T3細胞細損傷具有保護作用，桑黃子實體多糖的抗氧化機制可能由Nrf2通路介導，提高GCLC、NQO1、GCLM的mRNA表達而實現(xiàn)。
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