領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為了確定苦蕎過敏原TBa(tartarybuckwheatallergen)的抗原表位及進(jìn)一步了解蕎麥過敏反應(yīng)機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)以苦蕎過敏原TBacDNA序列為模板,設(shè)計(jì)引物,克隆苦蕎過敏原TBa表位區(qū)段基因,分別構(gòu)建TBa及兩個(gè)表位區(qū)段原核表達(dá)載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)并純化,采用競爭ELISA對其免疫活性進(jìn)行分析與比較。SDS-PAGE及WesternBlot鑒定和檢測結(jié)果表明,目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中可高效表達(dá),其N端帶有6個(gè)組氨酸標(biāo)簽。Ni2+-NTA瓊脂糖柱親和純化得到了純度較高的目的片段。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,表達(dá)產(chǎn)物與蕎麥?zhǔn)称愤^敏病人血清中的IgE具有特異的結(jié)合活性。本研究為揭示苦蕎過敏蛋白結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
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