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—— 中國食品雜志社
目的:從噬菌體隨機肽庫中淘選模擬桔霉素表位的噬菌體粒子。方法:以抗桔霉素的單克隆抗體為配基,分別免疫親和淘選以融合蛋白形式表達在絲狀噬菌體M13外殼蛋白Ⅲ上的隨機7肽庫和12肽庫,以ELISA方法鑒定陽性克隆,同時進行DNA測序以分析插入的7肽和12肽的氨基酸序列。結果:經(jīng)過3輪淘選,在7肽庫中淘選到20株能與該抗體特異性結合的陽性克隆,在12肽庫中淘選到33株能與該抗體特異性結合的陽性克隆,且該結合均能被桔霉素阻斷,模擬表位的共有序列為X-組氨酸-賴氨酸-X-X-X-X,X為任意氨基酸。以7肽庫中親和力最強的克隆(P10)建立了競爭ELISA檢測方法,線性范圍為10～325ng/ml,檢測下限為10ng/ml;以12肽庫中親和力最強的克隆(P1)建立了競爭ELISA檢測方法,線性范圍為10～439ng/ml,檢測下限為10ng/ml。結論:噬菌體展示技術可成功淘選到桔霉素模擬表位,高度保守的His和Lys的存在,提示His和Lys在CIT與其配體的結合中可能起重要作用。
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