領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：構(gòu)建天然噬菌體單域重鏈抗體文庫，淘選可應(yīng)用于食品安全檢測的單域重鏈抗體。方法：以未經(jīng)免疫的健康羊駝(Lama pacos)外周血為起始材料，提取RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，根據(jù)重鏈抗體保守序列設(shè)計引物，通過半巢式PCR 法擴增獲得全套重鏈抗體可變區(qū)編碼基因，將其克隆至噬菌粒pHEN1，電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1 得到初級抗體庫，輔助噬菌體KM13 感染后得到噬菌體展示庫。采用固相淘選法分別對3 種人工抗原進行淘選。結(jié)果：單域重鏈抗體編碼基因得到有效擴增，經(jīng)10 次電轉(zhuǎn)化獲得初級文庫，命名為SNAL，實際庫容量達到1.6 × 107 個獨立克隆，菌落PCR 鑒定結(jié)果表明，克隆效率約為87%，輔助噬菌體救援后得到的展示文庫命名為SNA-PDL，滴度達1013CFU/mL。對3 種不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA 和AFB1-OVA 的淘選均有富集現(xiàn)象。結(jié)論：構(gòu)建了天然噬菌體單域重鏈抗體文庫，文庫的多樣性較好，可以用于后續(xù)淘選。
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