領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
基于大腸桿菌的密碼子偏好性，對茶樹單寧酶基因CsTanA堿基進(jìn)行優(yōu)化，基因優(yōu)化后GC含量為51.9%，密碼子適應(yīng)指數(shù)為0.8，優(yōu)化前后基因序列的一致性為77.8%，以pET-30a為表達(dá)載體對優(yōu)化基因進(jìn)行重組表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)分析。A600 nm約0.6的重組菌株以1 mmol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷在30 ℃誘導(dǎo)12 h，破碎上清液重組單寧酶rCsTanA比活力為0.35 U/mg，鎳柱純化后的rCsTanA比活力為1.53 U/mg，純化倍數(shù)約為4.4。純化重組單寧酶rCsTanA分子質(zhì)量為39 kDa，其最適溫度和最適pH值分別為40 ℃和7.0。不同金屬離子濃度對酶活力的影響存在差異，在低濃度（1 mmol/L）條件下，K＋增強了rCsTanA 37.28%的酶活力，而Ag＋、Cu2＋和Fe3＋使該酶活力均喪失80%以上；而在高濃度（5 mmol/L）條件下，Cu2＋表現(xiàn)出完全抑制rCsTanA活性的特性。表面活性劑（十二烷基硫酸鈉、吐溫80和十六烷基三甲基溴化銨）和極性溶劑（甲醇、乙醇、丙三醇、異丙醇及丙酮）對rCsTanA活性具有較強抑制作用。本研究不僅實現(xiàn)了茶樹單寧酶的表達(dá)和酶學(xué)性表征，同時也豐富了單寧酶資源，為植物單寧酶的進(jìn)一步應(yīng)用研究提供了必要的理論支撐。
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