領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
將CRISPR/Cas12a系統(tǒng)與跨越式滾環(huán)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（saltatory rolling circle amplification，SRCA）相結(jié)合，建立一種快速、靈敏定量檢測(cè)海產(chǎn)品中副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）的方法（SRCA-Cas12a）。通過(guò)SRCA擴(kuò)增靶標(biāo)DNA，CRISPR/Cas12a系統(tǒng)識(shí)別靶標(biāo)DNA并裂解單鏈報(bào)告探針，從而建立SRCA-Cas12a檢測(cè)方法。分析該方法的特異性與靈敏度，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)和實(shí)際樣品檢測(cè)。結(jié)果顯示該方法可區(qū)分副溶血性弧菌和其他食源性致病菌，特異性良好。在最優(yōu)檢測(cè)體系下，建立了副溶血性弧菌菌液濃度的對(duì)數(shù)與熒光信號(hào)強(qiáng)度的線性關(guān)系，線性方程為y=1.847 2x＋2.473 8（R2=0.986 6），檢出限為3.6 CFU/mL（RSN=3）。在人工污染樣品中副溶血性弧菌的加標(biāo)回收率為95.5%～104.4%。在實(shí)際樣品檢測(cè)中，該方法的敏感性為100.0%、特異性為95.2%、符合率為97.2%。本研究所建立的SRCA-Cas12a方法具有特異性好、檢測(cè)限低的優(yōu)點(diǎn)，為副溶血性弧菌的快速定量檢測(cè)提供了一種新策略。
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