領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
將熒光染料疊氮溴化乙錠（ethidium monoazide，EMA）與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，用于腸炎沙門氏菌活菌的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化結(jié)果表明，當(dāng)EMA終質(zhì)量濃度50 μg/mL、曝光時(shí)間10 min時(shí)，可以抑制約107 CFU/mL腸炎沙門氏菌死菌DNA的擴(kuò)增；活菌靈敏度檢測(cè)結(jié)果顯示，EMA-PCR方法檢測(cè)限與單一PCR方法一樣均為27.5 CFU/mL，說明EMA處理既不會(huì)影響活菌DNA的擴(kuò)增也不會(huì)影響PCR方法的靈敏度。利用EMA-PCR方法檢測(cè)死活混合菌液時(shí)發(fā)現(xiàn)，添加EMA的實(shí)驗(yàn)組DNA條帶亮度會(huì)隨著活菌比例的降低而變暗，且當(dāng)樣品中全是死菌時(shí)，沒有目標(biāo)條帶出現(xiàn)；而不添加EMA的對(duì)照組DNA條帶亮度沒有變化，當(dāng)樣品中全是死菌時(shí)，目標(biāo)條帶依然清晰可見。說明添加EMA可以達(dá)到區(qū)分死活菌的目的，EMA-PCR方法只檢測(cè)樣品中的活菌，避免了死菌DNA造成假陽性的可能性。
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