為了探究牦牛乳硬質(zhì)干酪中苦味肽組成特征,采用氯仿-甲醇法提取苦味肽,通過(guò)Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜進(jìn)行分離純化,并利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)對(duì)其分離的苦味較強(qiáng)組分進(jìn)行特征鑒定。結(jié)果表明:經(jīng)Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜分離得到3 個(gè)不同分子質(zhì)量的組分,組分Ⅱ具有明顯苦味。LC-MS/MS鑒定出組分Ⅱ中存在14 種苦味肽,主要為氨基酸殘基數(shù)目7~17 個(gè)、分子質(zhì)量小于2 000 D的小肽,苦味肽序列中存在的疏水性氨基酸主要有脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸,800~1 500 D苦味肽占64.29%,源自β-酪蛋白(β-casein,β-CN)降解產(chǎn)物的苦味肽占92.86%。因此,干酪成熟過(guò)程中源自β-CN的具有較強(qiáng)疏水性、分子質(zhì)量小于2 000 D的混合多肽的積累可能對(duì)干酪苦味的產(chǎn)生有較大影響。
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