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含4 種食源性病毒檢測靶標(biāo)多聯(lián)裝甲RNA的制備、純化與定值
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 229 發(fā)表時間: 2019-06-11
作者: 姚 琳,張 奇,李風(fēng)鈴,張 媛,逄鳳嬌,江艷華,王聯(lián)珠,翟毓秀
關(guān)鍵詞: 食源性病毒;多聯(lián)裝甲RNA;Qβ噬菌體;陽性質(zhì)控樣品;實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
摘要:

基于Qβ噬菌體裝甲RNA制備平臺構(gòu)建同時含有諾如病毒(norovirus,NoV)、甲肝病毒(hepatitis A virus,HAV)、輪狀病毒(rotavirus,RV)、星狀病毒(astrovirus,AstV)檢測靶標(biāo)RNA的多聯(lián)裝甲RNA(multiplex armored RNA,AR-MulV),并進(jìn)行純化與初步定值。結(jié)果表明,重組質(zhì)粒在大腸桿菌中成功表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物大小約為14.1 kDa;制備的AR-MulV經(jīng)純化后無雜蛋白與殘留重組質(zhì)粒,電鏡下可見大量結(jié)構(gòu)形態(tài)完整的病毒樣顆粒,大小約為25 nm。初步定值結(jié)果顯示,AR-MulV中GI型NoV、GII型NoV、HAV、RV和AstV檢測靶標(biāo)RNA的含量分別為(1.24±0.2)×107、(2.54±0.6)×107、(2.24±0.3)×107、(2.96±0.5)×107 copies/μL和(3.19±0.4)×107 copies/μL。本研究基于Qβ噬菌體裝甲RNA制備平臺成功制備同時包含4 種食源性病毒標(biāo)準(zhǔn)方法檢測靶標(biāo)的多聯(lián)裝甲RNA,為食源性病毒的分子檢測以及多重實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)陽性質(zhì)控樣品的研發(fā)提供新思路。

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