領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
利用基因重組技術(shù),克隆了大豆(Glycinemax(L.)Merr.)的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)全基因,構(gòu)建pET-GMPAL工程表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌E.coliBL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),并利用細(xì)胞裂解液得到的粗酶液轉(zhuǎn)化L-苯丙氨酸生成肉桂酸。通過8%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析表明,獲得了分子量在77.9kD的一條蛋白質(zhì)特異表達(dá)帶,特異蛋白質(zhì)表達(dá)量達(dá)到總蛋白質(zhì)含量的8%左右。通過初步發(fā)酵,獲到具有PAL活性的粗酶液裂解液,粗酶的比活力達(dá)到211.7μmol/gpro·min(3529μkat/kg),高于紅酵母PAL和歐芹重組PAL表達(dá)的比活力。結(jié)果表明克隆重組的大豆PAL基因通過表達(dá)質(zhì)粒pET-GMPAL在E.coli中能高效地表達(dá)為有催化功能的高活力酶。
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