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應(yīng)用DPO-PCR技術(shù)檢測腸出血性大腸桿菌O157∶H7
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 165 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 徐義剛,李丹丹,崔麗春,劉忠梅,李蘇龍
關(guān)鍵詞: 腸出血性大腸桿菌O157∶H7;rfbE基因;雙啟動(dòng)寡核苷酸引物聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
摘要:

利用雙啟動(dòng)寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)檢測腸出血性大腸桿菌O157∶H7。根據(jù)DPO引物設(shè)計(jì)原則,以腸出血性大腸桿菌O157∶H7 rfbE 基因?yàn)榘谢蛟O(shè)計(jì)一對DPO引物,經(jīng)過反應(yīng)體系的優(yōu)化,建立了腸出血性大腸桿菌O157∶H7 DPO-PCR檢測方法, 其檢測靈敏度約為94 CFU/mL。與常規(guī)PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法對退火溫度不敏感,在引物設(shè)計(jì)和實(shí) 驗(yàn)過程中不需要對引物及其退火溫度反復(fù)優(yōu)化,同時(shí)基于DPO引物的特殊結(jié)構(gòu)又增強(qiáng)了其特異性。DPO-PCR方法 設(shè)計(jì)簡易、特異性強(qiáng),為致病性微生物的快速準(zhǔn)確檢測提供了新途徑。

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