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河豚毒素DNA適配子的制備及應(yīng)用
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 179 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 邵碧英,陳 彬,陳文炳,楊 方,繆婷玉,彭 娟
關(guān)鍵詞: 河豚毒素;適配子;熒光染料;檢測(cè)
摘要:

人工合成78 個(gè)堿基的隨機(jī)ssDNA文庫,采用指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)與誘變聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction)結(jié)合的方法,通過篩選富集、克隆、測(cè)序,獲得了與河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特異結(jié)合的單克隆DNA適配子A3。DNA適配子A3的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為莖環(huán)結(jié)構(gòu),與TTX的親和力為1.254。對(duì)適配子和TTX結(jié)合的磷酸鹽緩沖液pH值、熒光染料結(jié)合時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,最適pH值為7.5,最佳結(jié)合時(shí)間為10 min。建立的快速篩選檢測(cè)TTX的DNA適配子-熒光染料法對(duì)TTX的檢出限為10-6 mo1/L。

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