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嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的C末端結(jié)構(gòu)域功能及生淀粉結(jié)合位點(diǎn)分析
來源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 165 發(fā)表時(shí)間: 2020-03-30
作者: 曾靜，郭建軍，涂熠坤，袁林
關(guān)鍵詞: 嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶；生淀粉結(jié)合域；生淀粉結(jié)合位點(diǎn)；定點(diǎn)突變
摘要:

為確定嗜熱酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中參與生淀粉結(jié)合的結(jié)構(gòu)區(qū)域，對Gt-amy的C末端結(jié)構(gòu)域（C-terminal domain，CTD）進(jìn)行缺失突變，并比較Gt-amy及CTD缺失突變體Gt-amy-T的酶學(xué)性質(zhì)。在與Gt-amy相同的條件下，Gt-amy-T不能結(jié)合和降解玉米淀粉，CTD可有效結(jié)合玉米淀粉。以可溶性淀粉為底物，Gt-amy-T的kcat值約為Gt-amy的77.9%。CTD的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析顯示CTD不是典型的淀粉結(jié)合結(jié)構(gòu)域，但是本研究證實(shí)CTD屬于生淀粉結(jié)合結(jié)構(gòu)域，在Gt-amy結(jié)合并降解生淀粉中發(fā)揮重要作用，并且CTD有利于Gt-amy發(fā)揮可溶性淀粉酶活力。此外，本研究將CTD中Tyr殘基定點(diǎn)突變?yōu)锳la殘基，通過比較CTD與突變體的玉米淀粉結(jié)合能力以及Gt-amy與Gt-amy W501A/W514A的玉米淀粉結(jié)合率和降解率，確定CTD中W501和W514可能是生淀粉結(jié)合位點(diǎn)。

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